碧云天總SOD活性檢測(cè)試劑盒(S0101S)是一種基于WST-8的顯色反應(yīng)，通過比色來檢測(cè)細(xì)胞、組織或其它樣品中SOD即超氧化物歧化酶活性的試劑盒。

目前測(cè)SOD 活性測(cè)定法有多種，最初的核黃素法、到 NBT(氮藍(lán)四唑)法，NBT產(chǎn)生的甲臜染料水溶性差，易和被還原的黃嘌呤氧化酶相互作用，抑制百分率達(dá)不到 100%等，從而使檢測(cè)的靈敏度和精確度受到影響；本試劑盒采用的是目前穩(wěn)定性更好、靈敏度更高的改性WST法即 WST-8法，改性的 WST 可以和黃嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase, XO)催化產(chǎn)生的超氧化物陰離子(O 2 .- )反應(yīng)產(chǎn)生水溶性的甲臜染料，后者在 450nm 處有最大吸收。

使用說明：

1.樣品的準(zhǔn)備：

細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：對(duì)于貼壁細(xì)胞，吸凈細(xì)胞培養(yǎng)液，用4℃或冰浴預(yù)冷的PBS或生理鹽水洗滌一遍，按照每100萬細(xì)胞加入100-200微升的比例加入本試劑盒提供的SOD樣品制備液，適當(dāng)吹打以充分裂解細(xì)胞；對(duì)于懸浮細(xì)胞，600g離心5分鐘收集細(xì)胞，用4℃或冰浴預(yù)冷的PBS或生理鹽水洗滌一遍，按照每100萬細(xì)胞加入100-200微升的比例加入SOD樣品制備液，適當(dāng)吹打，以充分裂解細(xì)胞。4℃約12,000g離心3-5分鐘，取上清作為待測(cè)樣品。

2.試劑盒的準(zhǔn)備工作：

WST-8/酶工作液的配制：按照每個(gè)反應(yīng)160μl的體積配制適量的WST-8/酶工作液。均勻混合151μl SOD檢測(cè)緩沖液、8μl WST-8和1μl酶溶液，即可配制成160μl WST-8/酶工作液。根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品)的數(shù)量，配制適量的WST-8/酶工作液。配制好的WST-8/酶工作液4℃或冰浴保存，可以在當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

3.樣品測(cè)定：

使用96孔板設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。依次加入待測(cè)樣品和其它各種溶液。加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后充分混勻。注意：加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。

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